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    DNA贝博下载服务

    发布时间:2014年01月27日发布人:贝博下载地址生物技术关注度:12537

    1 DNA贝博下载原理

    2 贝博下载常见问题 

    3 常备通用ballbet贝博app 

    4 DNA贝博下载的注意事项

    5 DNA贝博下载服务特色

     

    1 DNA贝博下载原理

            1977年,英国人Fred Sanger发现在DNA复制过程中掺入ddNTP,会产生一系列末端终止的DNA链,并能通过电泳按长度分辨。不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。由此诞生了以Sanger命名的贝博下载原理即双脱氧链终止法贝博下载原理。

    Sanger法贝博下载的原理:(见下图)

     

     

     

     

    2 贝博下载常见问题

    Q1.DNA贝博下载的原理是什么?步骤如何?ABI 3730XL贝博下载的准确程度如何?

    答:

             DNA贝博下载的原理是末端终止法。具体步骤如下:

             1.  定量:对样品及ballbet贝博app进行定量。

             2.  贝博下载反应:在反应体系中加入已定量的模板和ballbet贝博app,BigDye等试剂,PCR仪上完成贝博下载反应。

             3.  读取数据:根据荧光的不同,读取被测样品的碱基序列。

             ABI公司目前承诺贝博下载结果在800bp以内准确率为98.5%。

    Q2.为什么在贝博下载报告上找不到我的ballbet贝博app序列?

    答:

             1. 如果您提供的样品是PCR产物,在贝博下载报告上找不到您的ballbet贝博app是正常的。这是因为贝博下载反应是通过对被荧光标记的ddNTP的读取而获得基因序列的,而贝博下载ballbet贝博app由于没有荧光标记,因此自然在贝博下载结果中就不会被识别。有两种方法可以得到您的ballbet贝博app序列。对于较短的PCR产物(<800bp),可以用另一端的ballbet贝博app进行贝博下载,从另一端贝博下载可以一直测到序列的末端,就可以在序列的末端得到您的ballbet贝博app的反向互补序列。对于较长的序列,一个贝博下载反应测不到头,因此就只能将您的PCR产物片段克隆到适当的载体中,用载体上的通用ballbet贝博app进行贝博下载。由于载体上的通用ballbet贝博app与您的插入序列之间还有一段距离,因此就可以得到您的完整的ballbet贝博app序列。由于在贝博下载的起始端总会有一些碱基无法准确读出,因此,您如果想得到您的PCR产物的完整序列,最好克隆后进行贝博下载。

             2. 如果您提供的样品是质粒或菌液,PCR产物用载体克隆后,由于克隆的方向是随机的,因此,当您在一条链上找不到您的ballbet贝博app序列时,请尝试在互补链上寻找您的ballbet贝博app序列。

             3. 当贝博下载ballbet贝博app离您的插入片段很近时,有时可能也无法找到您的ballbet贝博app的全序列。这主要是因为有时贝博下载的起始端由于未去除的染料或ballbet贝博app二聚体的干扰,造成起始区的序列不好,可能无法找到您的ballbet贝博app完整序列。

             4. 有时,质粒做模板进行贝博下载时,由于某些原因,质粒上没有插入外援片段,为空载体,所测的序列完全为载体序列,此时自然也找不到ballbet贝博app序列。

    Q3. 我的ballbet贝博app做PCR效果很好,为什么用于贝博下载总得不到好的结果?

    答:

             用于贝博下载的ballbet贝博app比用作PCR反应的ballbet贝博app要求高,以下是不适合用于贝博下载反应的ballbet贝博app类型:

             1.    不纯的ballbet贝博app:用于贝博下载的ballbet贝博app纯度要求很高,合成中的小片段会直接造成严重的背景峰,因此用于贝博下载的ballbet贝博app序列长度一般在24个碱基之内,因为过长的ballbet贝博app纯度不易保证。

             2.    简并ballbet贝博app,随机ballbet贝博app和有特殊标记的ballbet贝博app。

     

    3 常备通用ballbet贝博app

    ballbet贝博app名称
    ballbet贝博app序列
    3'AOX
    5'-GGCAAATGGCATTCTGACAT-3'
    35s
    5'-GACGCACAATCCCACTATCC-3'
    3'AD
    5'-AGATGGTGCACGATGCACAG-3'
    3'BD
    5'-TAAGAGTCACTTTAAAATTTGTATC-3'
    5'AOX1
    5'-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3'
    ACYCDuetUP1Primer
    5'-GGATCTCGACGCTCTCCCT-3'
    A-FACTOR
    5'-TACTATTGCCAGCATTGCTGC-3'
    AUG1F
    5'-CAATTTACATCTTTATTTATTAACG-3'
    AUG1R
    5'-GAAGAGAAAAACATTAGTTGGC-3'
    BAC1
    5'-AACCATCTCGCAAATAAATA-3'
    BAC2
    5'-ACGCACAGAATCTAGCGCTT-3'
    BGH rev
    5'-TAGAAGGCACAGTCGAGGC-3'
    C-CMV-24
    5'-TTAGGACAAGGCTGGTGG-3'
    CMV-F
    5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
    CMV-Profor
    5'-ATGGGCGGTAGGCGTG-3'
    CMV-R
    5'-GTTCACGGTGCCCTCC-3'
    c-mycrev
    5'-CTCTTCTGAGATGAGTTTTTG-3'
    DEST22F
    5'-TATAACGCGTTTGGAATCACT-3'
    DEST22R
    5'-AGCCGACAACCTTGATTGGAGAC-3'
    DsRed1-C-r
    5'-AGCTGGACATCACCTCCCACAACG-3'
    DsRed1-N-f
    5'-GTACTGGAACTGGGGGGACAG-3'
    DsRed1-N-primer
    5'-GTACTGGAACTGGGGGGACAG-3'
    DuetDOWN1
    5'-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3'
    DuetUP2 Primer
    5'-TTGTACACGGCCGCATAATC-3'
    EBV Reverse
    5'-TGTGGTTTGTCCAAACTCAATC-3'
    EBV-R
    5'-GTGGTTTGTCCAAACTCATC-3'
    EGFP-Nrev
    5'-CGTCGCCGTCCAGCTC-3'
    EMCVIRES reverse:
    5'-CCTTATTCCAAGCGGCTTCGG-3'
    GAL4 AD-F
    5'-TACCACTACAATGGATG-3'
    GAL4 BD
    5'-TCATCGGAAGAGAGTAG-3'
    GLP1
    5'-TGTATCTTATGGTACTGTAACTG-3'
    GLP2
    5'-CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCA-3'
    GST-CS(Cfor)
    5'CCAGCAAGTATATAGCATGGCC-3'
    H1primer
    5'-CGCTATGTGTTCTGGGAAAT-3'
    HGHrev
    5'-CTGGGGAGGGGTCACAGGG-3'
    M13(-96)
    5'-CCCTCATAGTTAGCGTAACG-3'
    M13F
    5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'
    M13F(-47)
    5'-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3'
    M13R
    5'-CAGGAAACAGCTATGACC-3'
    M13R(-26)
    5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'
    M13R(-48)
    5'-AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3'
    malEfor
    5'-GGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCC-3'
    mtDNA-D-LoopF
    5'-AGGACTACGGCTTGAAAAGC-3'
    mtDNA-D-LoopR
    5'-ATGTGCCTGACCGAGGAACCAG-3'
    Mtfor
    5'-CATCTCAGTGCAACTAAA-3'
    N-CMV-30
    5'-ATAACCCCGCCCCGTTG-3'
    P12584
    5'-TTTTCAGTATCTACGAT-3'
    P17110
    5'-TACCACTACAATGGATG-3'
    P24990
    5'-TCATCGGAAGCGAGTAG-3'
    P31430
    5'-CGTTTTAAAACCTAAGAGTCAC-3'
    PAS2-1F
    5'-TCATCGGAAGCGAGTAG-3'
    PAS2-1R
    5'-CGTTTTAAAACCTAAGAGTCAC-3'
    PB42ADF
    5'-CCAGCCTCTTGCTGAGTGGAGATG-3'
    PB42ADR
    5'-AAGCCGACAACCTTGATTGGAG-3'
    pBAD_F
    5'-ATGCCATAGCATTTTTATCC-3'
    pBAD_R
    5'-GATTTAATCTGTATCAGG-3'
    pbd-gal4-f
    5'-GCCTCTAACATTGAGACAGC-3'
    pbd-gal4-r
    5'-AAGAGTTACTCAAGAACAAGAA-3'
    pbi-121(35s)
    5'-GACGCACAATCCCACTATCC-3'
    pBMN_5'
    5'-GCTTGGATACACGCCGC-3'
    pBRforBam
    5'-CTTGGAGCCACTATCGAC-3'
    pBRforEco
    5'-AATAGGCGTATCACGAGGC-3'
    pBRrevBam
    5'-GGTGATGTCGGCGATATAGG-3'
    pBRrevHind
    5'-GCGTTAGCAATTTAACTGTG-3'
    PBV220F
    5'-AAGAAGGGCAGCATTCAAAG-3'
    PBV220R
    5'-CTGCGTTCTGATTTAATCTG-3'
    pCAMBIA1301-3'(HindIII)
    5'-GCGATTAAGTTGGGTAACGC-3'
    pCAMBIA1301-5'(ECORI)
    5'-CCAGGCTTTACACTTTATGC-3'
    PCDNA3.0-F2
    5'-CTCTGGCTAACTAGAGAACC-3'
    PCDNA3.0-R2
    5'-GGCAACTAGAAGGCACAGTC-3'
    PCDNA3.1F
    5'-CTAGAGAACCCACTGCTTAC-3'
    PCDNA3.1R
    5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'
    pCEP Frorward
    5'-AGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCG-3'
    PCEP-F
    5'-AGAGCTCGTTTAGTGAACCG-3'
    PCMV-F
    5'-TCTAAAAGCTGCGGAATTGT-3'
    PCMV-F
    5'-TTCCAAAATGTCGTAATAAC-3'
    PCMV-R
    5'-TCCAAACTCATCAATGTATC-3'
    PCMV-R
    5'-ATTATAGAGGACACCTAGTC-3'
    pDBLeu-3'
    5'-CAGATGGAACGGTCTTTAAATG-3'
    pDBLeu-5'
    5'-GAATAAGTGCGACATCATCATC-3'
    PDONR-F
    5'-TCGCGTTAACGCTAGCATGGATCTC-3'
    PDONR-R
    5'-GTAACATCAGAGATTTTGAGACAC-3'
    pDsRED-express-C1-F
    5'-TCCCACAACGAGGACTACAC-3'
    pDSRED-N-R
    5'-TGAAGCGCATGAACTCCTTG-3'
    PEF-F
    5'-TCAAGCCTCAGACAGTGGTTC-3'
    pEGFP1F
    5'-CGGCAGGGTCGGAACAGG-3'
    PEGFP-C-3'
    5'-TATGGCTGATTATGATCAGT-3'
    PEGFP-C-5'
    5'-CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG-3'
    PEGFP-N-3'
    5'-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3'
    PEGFP-N-5'
    5'-TGGGAGGTCTATATAAGCAGAG-3'
    pETup
    5'-ACGATGCGTCCGGCGTAGAGGA-3'
    pGAL4-ADrv
    5'-GAACTTGCGGGGTTTTTC-3'
    pGAL4-BDrv
    5'-AATCATAAGAAATTCGCCC-3'
    pGAP Forward
    5'GTCCCTATTTCAATCAATTGAA-3'
    PGEX-3'
    5'-CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG-3'
    PGEX-5'
    5'-GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG-3'
    PIRES2-EGFP-F
    5'-GTAGGCGTGTACGGTGGGAG-3'
    PIRES3-EGFP-R
    5'-AACGCACACCGGCCTTATTC-3'
    pJET1.2-F
    5'CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3'
    pJET1.2-R
    5'AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3'
    pLEXA-F
    5'-CGTCAGCAGAGCTTCACCAT-3'
    pLEXA-R
    5'-TAAAACCTAAGAGTCACTTT-3'
    pLNCX-F
    5'-AGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCG-3'
    pLNCX-R
    5'-ACCTACAGGTGGGGTCTTTCATTCCC-3'
    pLXSN-F
    5'-CTTGAACCTCCTCGTTCGAC-3'
    pLXSN-R
    5'-GTTGCTGACTAATTGAGATG-3'
    pMAL-C2X-F
    5'-TGCGTACTGCGGTGATCAAC-3'
    pMAL-C2X-R
    5'-CTGCAAGGCGATTAAGTTGG-3'
    pMD19T490R
    5'-CACAGGAAACAGCTATGACC-3'
    pMSCV-3'
    5'-GAGACGTGCTACTTCCATTTGTC-3'
    pMSCV-5'
    5'-CCCTTGAACCTCCTCGTTCGACC-3'
    PPC86-F
    5'-TATAACGCGTTTGGAATCACT-3'
    PPC86-R
    5'-GTAAATTTCTGGCAAGGTAGAC-3'
    PQE30F
    5'-TGAGCGGATAACAATTTCAC-3'
    PQE30R
    5'-GTTCTGAGGTCATTACTGG-3'
    pRECEIVER-M03F
    5'-GCGGTAGGCGTGTACGGT-3'
    pRECEIVER-M03R
    5'-CCGGACACGCTGAACTTGT-3'
    Primer TriplEx-LD-5'
    5'-CTCGGGAAGCGCGCCATTGTGTTGG-3'
    Primer TriplEx-LDrv-3'
    5'-ATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGC-3'
    PSG5(BAMHI)-F
    5'-GCTGGTTATTGTGCTGTCTC-3'
    pSG5-3
    5'-GAAATTTGTGATGCTATTGC-3'
    PSG5-R(SV40)
    5'-AAACCACAACTAGAATGCAGT-3'
    Psos3'
    5'-GCCAGGGTTTTCCCAGT-3'
    Psos5'
    5'-CCAAGACCAGGTACCATG-3'
    pTARGET-SEQ
    5'-TTACGCCAAGTTATTTAGGTGACA-3'
    PTR5
    5'-CTCCGAGATCTGGACGAGC-3'
    PTRC99C-F
    5'-TTGCGCCGACATCATAAC-3'
    PTRC99C-R
    5'-CTGCGTTCTGATTTAATCTG-3'
    PTRCHISA-F
    5'-CATGGTATGGCTAGCATGAC-3'
    PTRCHISA-R
    5'-CAGGCTGAAAATCTTCTCTC-3'
    pTrcHis-fw
    5'-TTAAAGAGGTATATATTAATGTATCG-3'
    pTrcHis-rv
    5'-ATCTGTATCAGGCTGAAAATC-3'
    pYes2.R
    5'-TCGGTTAGAGCGGATGTG-3'
    RVP3
    5'-CTAGCAAAATAGGCTGTCCC-3'
    RVP4
    5'-GACGATAGTCATGCCCCGCG-3'
    S.TAG
    5'-CGAACGCCAGCACATGGACA-3'
    S1
    5'-CAACGTGAAAAAATTATTATTCGC-3'
    S6
    5'-GTAAATGAATTTTCTGTATGAGG-3'
    SP6
    5'-ATTTAGGTGACACTATAG-3'
    T3
    5'-ATTAACCCTCACTAAAGGGA-3'
    T7
    5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
    T7 EEV
    5'-ATGTCGTAATAACCCCGCCCCG-3'
    T7(17BASE)
    5'-ACATCCACTTTGCCTTTCTC-3'
    T7TER
    5'-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
    TKPAreverse
    5'-CTTCCGTGTTTCAGTTAGC-3'
    TRXF
    5'-CATATGAGCGATAAAATTATTCAC-3'
    TRXR
    5'-GGATCCCTTGTCATCGTCATCACCA-3'
    U6
    5'-ATGGACTATCATATGCTTACCGTA-3'
    UB-F
    5'-TCAGTGTTAGACTAGTAAATT-3'
    V5rev
    5'-ATCGAGACCGAGGAGAGG-3'
    Xpressfor
    5'-AGCATGACTGGTGGACAG-3'
    27F
    5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
    515F
    5'-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3'
    21F
    5'-TTCCGGTTGATCCTGCCGGA-3'
    312F
    5'-TCCTACGGGAGGCAGCAGCT-3
    1492R
    5'-GGTACCTTGTTACGACTT-3'
    1525R
    5'-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3'
    nu-SSU-0817-5'
    5'-TTAGCATGGAATAATRRAATAGGA-3'
    nu-SSU-1536-3'
    5'-ATTGCAATGCYCTATCCCCA-3'
    ITS1
    5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'
    ITS4
    5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'
    ITS5
    5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'

     

    4 DNA贝博下载的注意事项

    贝博下载样品要求

    1. PCR原液 

            o  片断通常大于200bp; 

            o  提供浓度大于50ng/ul,体积大于50ul; 

            o  2ul电泳检测条带清晰无杂带。 

    2. PCR已纯化 

            o  PCR产物溶于超纯水中; 

            o  浓度大于50ng/ul,体积大于20ul; 

            o  电泳检测条带单一。 

    3. 质粒要求 

            o  质粒浓度大于100ng/ul,体积大于20ul; 

            o  .建议使用相关试剂盒提取; 

            o  建议同时提供1ml菌液; 

            o  大质粒需要注明载体长度。 

    4. 菌液模板要求 

            o  说明载体的抗性,我们提供Amp 、kan、chl、tet四种抗生素; 

            o  对于低拷贝质粒请直接提供1ug纯化质粒; 

            o  提供1ml左右的过夜培养菌液,加15%灭菌甘油,于离心管中封口保存,防止交叉污染或泄漏,特别是热天路远的最好是这样处理一下以免菌死掉,但容易污染; 

            o  建议尽量提供穿刺培养的菌种,或用新鲜的菌装到冰盒里运输 

    5. ballbet贝博app要求 

            o  .浓度大于3.2umol/l,体积大于20ul; 

            o  随机ballbet贝博app和兼并ballbet贝博app不适合贝博下载; 

            o  尽可能提供ballbet贝博app全序列,PCR退火温度;. 

            o  T7、SP6、M13(+)、M13(-)、T3等通用ballbet贝博app我们免费提供。

    样品类型及注意事项

    样品类型

    收费标准

    注意事项

    500-1000ul新鲜菌液
    可以提供5ml菌液或沉淀菌体直接提取质粒
    质粒
    浓度要求大于100ng/ul,大于20ul(反应个数多相应增加)
    建议送前鉴定浓度。建议不要溶于TE,要溶于超纯水。因为TE离子浓度很高,抑制贝博下载反应,建议纯化后溶于15-20ul超纯水中
    PCR已纯化
    浓度要求大于50ng/ul,20ul左右(反应个数多相应增加)
    建议送前鉴定浓度。请注意我处是取2ul原液用1%琼脂糖胶鉴定,客户经常会取5ul鉴定。建议纯化后溶于15-20ul超纯水中
    PCR未纯化
    浓度要求大于50ng/ul,大于50ul(不宜分离相差小于150BP的多个片段)
    建议送前鉴定浓度。请注意我处是取2ul原液用1%琼脂糖胶鉴定,客户经常会取5ul鉴定。如浓度过低我们会直接停止实验,通知客户重供样。

    现象描述

    可能原因

    是否收费

    菌培养不好或失败
    挑克隆有误,菌污染,订单提供信息有误
    质粒抽提不成功
    质粒太大或活化方式不好、转化不好、拷贝数低、培养方式不当
    贝博下载无信号、信号弱
    ballbet贝博app与模板结合不好(ballbet贝博app或模板原因)
    鉴定质粒或PCR浓度低,取消实验
    建议PCR(20ul) 、质粒(30ul)去离子水溶解
    设计ballbet贝博app和序列拼接
    大片段贝博下载
    抽提出质粒但贝博下载不成功
    ballbet贝博app与模板结合不好(ballbet贝博app或模板原因)
    贝博下载杂峰
    ballbet贝博app不纯,模板不纯
    信号中断或衰减
    高级结构,GC rich,重复序列。
    贝博下载双峰
    非单克隆、杂合子、ballbet贝博app特异性差、重复序列、Poly(A/T/G/C)结构、PCR非特异性扩增
    空载体
    插入失败,培养过程中片段丢失
    客户提供ballbet贝博app导致结果不理想
    ballbet贝博app不纯,ballbet贝博app不合适贝博下载
    PCR原液纯化后但贝博下载不成功
    ballbet贝博app与模板结合不好(ballbet贝博app或模板原因)
    收纯化费,不收贝博下载费

     

    5 贝博下载地址DNA贝博下载服务特色

    1、全新的3730XL贝博下载仪:

     

     

            3730XL贝博下载仪可以高自动化操作,2小时左右即可达到贝博下载要求;液体分离胶使读序长度达1100bp,精确读长达800bp。利用Seqence5.2新型碱基识别与质量评分软件,贝博下载准确性有了极大的提高;电泳温度可达70C,有效去除二级结构的影响;双色激光两侧同时激发,使得灵敏度极高,荧光信号强度高度均匀,提高了贝博下载模板DNA的浓度的适应范围并且能进行超速贝博下载。

    2、高素质贝博下载队伍:

            贝博下载人员都是分子生物学本科以上学历,并经过了严格培训;熟练掌握所有贝博下载仪器和贝博下载相关实验,认真负责的工作态度,绝不搞错客户的贝博下载样品,绝不把实验交给实习生,保证差错率做到最小甚至杜绝!

    3、贝博下载速度快:

             菌和PCR未纯化48小时内出结果;质粒和PCR已纯化,24小时出结果。

    4、价格合理:

             根据不同样品定出不同价格,有价可以测,有样品就可以测,用最优惠最合理的价格充分配合你的实验和经费。

    5、困难模板特殊服务:

             高GC,发夹结构,POLY结构等,根据不同模板做出不同贝博下载方案,量身定做,使你在贝博下载中节省更多时间,实验顺利进行。

    6、保密性强:

             交给我们东西无原则绝对保密。

     

     

     

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